一、 原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的SEM，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的SEM和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃西林代谢物的衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的SEM含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃西林代谢物含量。
二、 试剂盒技术指标：
试剂盒灵敏度： 0.1 ppb
样本检测下限：
组织、蜂蜜 0.2 ppb
鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰，检测下限为0.3 ppb
回收率：
鱼/虾水产组织 85%±10%
蜂蜜/鸡肉/肝脏样本 75%±15%
交叉反应率：
呋喃西林代谢物 100%
呋喃它酮代谢物 ?0.1%
呋喃妥因代谢物 ?0.1%
呋喃唑酮代谢物 ?0.1%
三、试剂盒组成
1．微量测试孔： 96T/8孔
2．标准液： 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb （1ml/瓶）
3．酶标记物： 12 mL
4．抗体浓缩液： 7 mL
5．底物缓冲液： 7 mL
6．底物液： 7 mL
7．终止液： 7 mL
8．20倍浓缩洗涤液 ：50 mL
9．复溶液： 50 mL
10．15.1 mg衍生化试剂
六、实验操作步骤
1．将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2．按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。
3．加标准品/样本50 µL /孔，然后加入抗体工作液50 µL/孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，室温反应30 min。
4．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
5．加入酶标记物100µl /孔，用封板膜盖板，室温反应20 min。
6．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。
7．显色：每孔加入底物缓冲液50 µL，再加底物液50 µL，轻轻振荡混匀，室温环境避光显色10 min。
8．测定：每孔加入终止液50µL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450 nm处（在20 min内读完数据），测定吸光度值。
七、结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标，以SEM标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中SEM实际浓度。
八、注意事项
１．用前将所有试剂温度回升至室温20-25 ℃。
２．用之后立即将所有试剂放回2-8 ℃冰箱。
３．在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照**的 洗板顺序操作是ELISA测定程序中的要点。
４. 所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
５．试剂及标本没有回到室温（20-25 ℃）会导致所有标准的OD值偏低。
６．在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性 不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
７. 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
8. 反应终止液为2 M硫酸，避免接触皮肤。
9. 不要使用过了有效日期的试剂盒，会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中的试剂。
10. 不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
11. 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5时，表示试剂可能变质。
九、储藏条件和保质期
储藏条件：试剂盒于2-8 ℃保存，不要冷冻。
保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。
