试剂盒储存条件及稳定性
试剂盒内组分室温保存即可,在适合的储存条件下该试剂盒未开封使用有效期为2年。
产品简介
该试剂盒采用磁珠纯化方式,适用于高通量测序文库(NGS)构建中DNA片段大小**分选和回收。DNA片段筛选试剂盒的结合缓冲液中含有超顺磁珠,根据磁珠悬浮液和样品的体积比可选择性结合DNA片段。经过磁性分离和乙醇清洗,低盐洗脱缓冲液或无核酸酶水洗脱的高纯度的DNA片段不含有核苷酸,引物,接头,酶和盐等污染物,可被直接用于下游应用,比如:酶切、测序、杂交、PCR反应等后续操作。可应用于手动或自动液体操作设备。
产品优势
1. 适合DNA的片段范围广:100 bp~50 kb;
2. 回收率高:回收率高达80%以上;
3. DNA纯度高:回收的PCR产物纯度高;
4. 操作**简单:20 min即可完成整个操作流程,无需离心;
5. 可适用于自动化、高通量PCR产物纯化。
6. 该试剂盒使用步骤和国外beckman Ampure XP高度一致,直接替换
7. 价格低,订货期短等明显优势。
产品原理
图1(核酸纯化试剂盒大致工作原理)
自备仪器和试剂
1.磁力架(建议使用百迈格生物磁力架,货号:BMB16-0.2)。
2.洗涤液:80%乙醇水溶液。
3.洗脱液:Buffer EB(10mM Tris-HCl,pH 8.0);或者RNase-Free Water。
操作步骤
请参考Beckman Ampure XP产品,直接替换。
性能实例:
1.核酸片段筛选测试:
测试目的:通过DNA片段筛选测试自主研发试剂盒与国外进口试剂盒性能差异
1)测试平台:安捷伦2100生物分析仪
2)实验方法:将大片段DNA打断后添加磁珠纯化试剂盒进行片段筛选,运用两步法对样品进行核酸片段筛选回收
图2如下:
图2,安捷伦2100生物分析仪片段选择对比测试结果:自主研发试剂盒与国际商品化品牌Ampure XP 试剂盒核酸片段回收对比(左图为Ampure XP品牌核酸纯化试剂盒安捷伦2100生物分析仪检测回收核酸平均片段大小,平均片段大小为265;右图为自主研发核酸纯化试剂盒利用安捷伦2100生物分析仪检测回收核酸平均片段大小,平均片段大小为265;)对比结果十分接近。
2. DNA回收效率测试
测试目的:检测对DNA片段的回收效率
实验方案:大片段DNA打断后,经试剂盒一步法纯化后(1.8X)测试DNA回收效率
表3如下:
测试品牌 |
DNA总投入量 |
纯化后DNA回收效率(%) |
Ampure XP-1 |
5ug |
84.20% |
Ampure XP-2 |
5ug |
83.87% |
自主研发试剂盒-1 |
5ug |
84.40% |
自主研发试剂盒-2 |
5ug |
84.12% |
由表3可以看出,DNA回收效率测试结果相近,都达到80%以上。
3.主流测序仪测序测试
测试目的:通过市面上主流基因测序仪平台检验试剂盒稳定性
1)测试平台:Proton测序平台
2)实验步骤:生物样本提取出核酸后进行文库制备+上机测序
3)核酸样品总数12个:6个对照品,6个测试品,其中文库制备部分,分别采用本公司自主研发的纯化试剂盒和Ampure XP商品化试剂盒进行核酸纯化。
表4如下:
Proton 平台测试结果 |
对照组(Ampure XP) |
测试组(自主研发) |
对比值 |
**比对率 |
5.17 |
5.42 |
0.25 |
GC含量平均值 |
41.14 |
40.85 |
- 0.29 |
原始数据积累平均值 |
6.88 |
7.33 |
0.45 |
根据表4体现的Proton测序分析结果看,表4中的**比对率与原始数据积累平均值越高越好,GC含量平均值对照组与测试组均符合标准。经测试结果分析,自主研发核酸纯化试剂盒对比进口商品化试剂盒性能相差无异,能够有效的替代进口的磁珠纯化试剂盒。