★ BioMag-SA GST标签蛋白纯化磁珠
一、概述:
百迈格生物GST融合蛋白纯化磁珠(1μm/2.8μm)是专为高效、**纯化谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白而设计的, 把含有GST 标签的融合蛋白添加到GST磁珠中,在经过短暂的孵育后,重组蛋白质将被吸附到GST磁珠上。接下来可以使用磁珠分离架把融合蛋白洗脱下来。磁分离技术消除了微管的变化、**简化纯化工艺和提高纯化效率,减少目的蛋白损失,适合科研和工业领域便捷地进行GST融合蛋白的纯化。
该产品为粒径更小的1μm/2.8μm磁珠,亲水高分子聚合物,比传统的琼脂糖或者二氧化硅具有很好的分散性能,更低的非特异性结合,可多次重复使用。
二、产品规格:
配体 |
GSH谷胱甘肽 |
货号 |
BMGST1000-2(1μm)/BMGST2800-2(2.8μm) |
磁珠基质 |
超顺磁亲水高分子磁珠 |
粒径大小 |
1μm/2.8μm(其他粒径可供选择) |
包装 |
1ml |
浓度 |
10mg/ml |
结合量(每克磁珠) |
?50mgGST融合蛋白 |
建议pH使用范围 |
1-10 |
沉降系数 |
3-6s |
建议单次使用量 |
0.3-0.5mg |
批次稳定性 |
<5% |
保存 |
2-8℃,禁止冷冻,使用前请充分混匀 |
电镜图 |
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三、通用使用方法
上样Buffer/结合洗涤液 Buffer: 1x PBSpH= 7.4。
10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4,140mM NaCl,2.7mM KCl,调节pH值至7.4。
洗脱Buffer: 10mM GSH(还原型谷胱甘肽),50mM Tris pH 8.0。
10mM Glutathione(还原型),50mM Tris-HCl,调节pH值至8.0。因Glutathione易氧化,需现用现配。
1 细胞破碎液准备
按每克湿重菌体/2~5ml上样Buffer的比例充分悬浮离心收集的菌体;600w功率,每循环超声3s,冷却3s,循环99×3次,破碎菌体;4℃、15000rpm离心15m,收集上清液,或用0.45μm滤膜过滤。(也可以使用其他方法进行细胞破碎,以达到让GST融合蛋白释放出来的目的)
2 使用前准备
2.1.充分摇匀磁珠。
2.2.取 100μl 磁珠到一个干净的管中。
2.3.把管放置在磁力架上收集磁珠,去上清液。
2.4.加入 1ml 上样 Buffer 充分混匀后,放置在磁力架上收集磁珠,去上清液。重复该次步骤 2 次。
3 融合蛋白结合及洗涤
3.1.用 100μl 的上样 Buffer 重新悬浮磁珠。
3.2.加入含有 GST 标签重组蛋白的样品轻轻混匀。
3.3.放置在振荡器或摇床中在室温下孵育 30-60min(如果重组蛋白在室温下不稳定,可以在 4℃进行)。
3.4.把孵育后的小管放置在磁力架上收集磁珠,去上清液。如果有需要可保留上清,另作检测。
3.5.加入 1ml 上样 Buffer 充分混匀后,放置在磁力架上收集磁珠,去上清液。重复该次步骤至少 3 次。
4 目的蛋白洗脱
4.1.加入 100μl 洗脱 Buffer 重新悬浮磁珠,放置在振荡器上室温震荡 5min
4.2.使用磁力架收集磁珠,把上清转移到另一个干净的管中。
4.3.重复步骤 1 和步骤 2.