大鼠一氧化氮(Human NO)ELISA Kit厂家代测

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样品收集、处理及保存方法 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激.使用不含热原和内毒素的试管.收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离, 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测.1000×g离心30分钟去除颗粒, 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物, 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻,尽可能的不要使用溶血或高血脂血.如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤,不要在37℃或更高的温度加热解冻,应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻, 试剂的准备 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存,稀释前将标准品振荡混匀, 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释.大鼠一氧化氮(Human NO)ELISA Kit厂家代测欢迎致电北京方程生物获取相关资料。

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大鼠一氧化氮(Human NO)ELISA Kit厂家代测3.2.3 结合物的制备 酶标记抗体的制备方法主要有两种，即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法. （1）戊二醛交联法：戊二醛是一种双功能团试剂，它可以使酶与蛋白质的氨基通过它而联结.碱性磷酸一般用此法进行标记.交联方法一步法、两步法两种.在一步法中戊二醛直接加入酶与抗体的混合物中，反应后即得酶标记抗体. ELISA中常用的酶一般都用此法交联.它具有操作简便、有效（结合率达60%-70%）和重复性好等优点.缺点是交联反应是随机的，酶与抗体交联时分子间的比例不严格，结合物的大小也不均一，酶与酶，抗体与抗体之间也有可能交联，影响效果.诹讲椒ㄖ校?br> 先将酶与戊二醛作用，透析除去多余的戊二醛后，再与抗体作用而形成酶标抗体.也可先将抗体与戊二醛作用，再与酶联结.两步法的产物中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的比例结合的，较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度，但其偶联的有效率较一步法低.

ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法.Engvall 和Perlmann于1971年**应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)". ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标 抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或 抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，**后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量.

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血清标本宜在新鲜时检测.如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应.如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深.一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存.冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡.混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测.反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存.保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂.

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