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人β-微管蛋白(Human TUBB)ELISA Kit厂家代测
发布时间:2017-03-19 00:03:01 编号:SC-16-3908699
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人β-微管蛋白(Human TUBB)ELISA Kit厂家代测

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3.2.3 结合物的制备 酶标记抗体的制备方法主要有两种,即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法. (1)戊二醛交联法:戊二醛是一种双功能团试剂,它可以使酶与蛋白质的氨基通过它而联结.碱性磷酸一般用此法进行标记.交联方法一步法、两步法两种.在一步法中戊二醛直接加入酶与抗体的混合物中,反应后即得酶标记抗体. ELISA中常用的酶一般都用此法交联.它具有操作简便、有效(结合率达60%-70%)和重复性好等优点.缺点是交联反应是随机的,酶与抗体交联时分子间的比例不严格,结合物的大小也不均一,酶与酶,抗体与抗体之间也有可能交联,影响效果.诹讲椒ㄖ校?br> 先将酶与戊二醛作用,透析除去多余的戊二醛后,再与抗体作用而形成酶标抗体.也可先将抗体与戊二醛作用,再与酶联结.两步法的产物中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的比例结合的,较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度,但其偶联的有效率较一步法低.人β-微管蛋白(Human TUBB)ELISA Kit厂家代测欢迎致电北京方程生物获取相关资料。

 

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人β-微管蛋白(Human TUBB)ELISA Kit厂家代测ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记.结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性.

标本因素对ELISA测定的影响,血清是**常用的ELISA标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,分为内源 性物质和外源性物质两种: 1. 内源性物质 有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质,可以不同程度影响检测结果.常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异 性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等. (1)类风湿因子 人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合,从而导致假阳性. 解决该情况的办法是:①用F(ab)2替代完整的IgG;②标本用联有热变性(63℃,10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效);③检测抗原时,可以用2-巯基乙醇等加入到标本 稀释液中,使RF降解..

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为避免上述干扰作用,解决的办法**是血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清,或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血 管中加入适当的促凝剂. (5)标本管中添加物质的影响 抗凝剂(如肝素,EDTA)、酶抑制剂(如NaN3可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性)及**分离血清的分离胶等均对E LISA测定有一定干扰作用. 综上所述,对临床检验 ELISA测定中出现的假阳性或假阴性结果,在考虑试剂因素和操作因素之外,更多的应从标本因素方面进行分 析,并应采取相应措施排除干扰作用,从而为临床提供正确可靠的检测结果..

 

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