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人β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(Human β-TG)ELISA Kit厂家代测
发布时间:2017-03-19 00:01:33 编号:SC-16-3908693
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人β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(Human β-TG)ELISA Kit厂家代测

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3.2.3 结合物的制备 酶标记抗体的制备方法主要有两种,即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法. (1)戊二醛交联法:戊二醛是一种双功能团试剂,它可以使酶与蛋白质的氨基通过它而联结.碱性磷酸一般用此法进行标记.交联方法一步法、两步法两种.在一步法中戊二醛直接加入酶与抗体的混合物中,反应后即得酶标记抗体. ELISA中常用的酶一般都用此法交联.它具有操作简便、有效(结合率达60%-70%)和重复性好等优点.缺点是交联反应是随机的,酶与抗体交联时分子间的比例不严格,结合物的大小也不均一,酶与酶,抗体与抗体之间也有可能交联,影响效果.诹讲椒ㄖ校?br> 先将酶与戊二醛作用,透析除去多余的戊二醛后,再与抗体作用而形成酶标抗体.也可先将抗体与戊二醛作用,再与酶联结.两步法的产物中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的比例结合的,较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度,但其偶联的有效率较一步法低.人β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(Human β-TG)ELISA Kit厂家代测欢迎致电北京方程生物获取相关资料。

 

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人β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(Human β-TG)ELISA Kit厂家代测ELISA载体的形状主要有三种:微量滴定板、小珠和小试管.以微量滴定板**为常用,专用于EILSA的产品称为ELISA板,国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式.为便于作少量标本的检测,有制成8联孔条或12联孔条的,放入座架后,大小与标准ELISA板相同.ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测,并可在特制的比色计上迅速读出结果.现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测,包括加样、洗涤、保温、比色等步骤,对操作的标准化极为有利.聚苯乙烯经射线照射后,其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加,应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多,但用于间接法测抗体时空白值较大.. 良好的ELISA板应该是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近.聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别,各种产品的质量差异很大,因此,每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能.常用的检查方法为:以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体,保温后洗涤,加底物显色,终止酶反应后,分别测每孔溶液的吸光度.控制反应条件,使各孔读数在吸光度0.8左右.计算全部读数的平均值.所有单个读数与全部读数的均数之差,应小于10%. 与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯.作为ELISA固相载体,聚氯乙烯的特点为质软板薄,可剪割,价廉,但光洁度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平整.聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高..

a检测的样本为细胞培养上清、细胞粗提液、人和动物的血清等, b样本收集后应立即-20保存,若长期保存应-70, c样本量要求:原则上做单孔检测应不少于100μl,建议若样本量充足**提供更多量样本 d建议客户在取材前先与北京方程生物公司销售技术人员沟通,前期的取材流程会直接影响您实验的结果 .

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血清标本宜在新鲜时检测.如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应.如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深.一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存.冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡.混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测.反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存.保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂.

 

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