人β-促脂素(Human β-LPH) ELISA Kit厂家代测
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3.2.2 抗原和抗体 制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与酶联结时其他杂蛋白的干扰.**用亲和层析纯的抗体，这样全部酶结合物均具有特异的免疫活性，可以在高稀释度进行反应，实验结果本底浅淡.如用F(ab')2进行标记，则更可避免标本中RF的干扰.在ELISA中用酶标抗原的模式不多，总的要求是抗原必须是高纯度的..人β-促脂素(Human β-LPH) ELISA Kit厂家代测欢迎致电北京方程生物获取相关资料。
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人β-促脂素(Human β-LPH) ELISA Kit厂家代测3.2.1酶 用于ELISA的酶应符合以下要求：纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，制备成酶结合物后仍继续保留它的活性部分和催化能力.**在受检标本中不存在相同的酶.另外，它的相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等. 在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP).在少数商品ELISA试剂中，应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等.国产ELISA试剂一般都用HRP制备结合物.HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，分子量为44000，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质.主酶无色糖蛋白在275nm波长处有**高吸收峰，辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有**高吸收峰.HRP的纯度用RZ(Reinheit Zahl，德文，意为纯度数）表示，是403nm的吸光度与280nm吸光度之比，高纯度的HRP的RZ≥?.0. HRP除符合上述的ELISA中标记酶的要求外，更有价格低廉和性质较稳定的特点.值得注意的是，在选用酶制剂时，除其纯度RZ外，更应注意酶的活力.高纯度的酶如保存不当，活力也会降低.酶制剂的活力以所含的酶活力单位表示，可用对底物作用后生成产物量的测定进行试验.. 国外很多ELISA试剂采用碱性磷酸酶（AP）作为标记酶.常用的AP有两个来源，分别从大肠杆菌和小牛肠膜中提取.不同来源的酶生化特性特性略不相同，从大肠杆菌中提取的AP分子量为80000，酶作用的**适合pH为8.0；用小牛肠膜中提取的AP分子量为100000，**适pH为9.6.在ELISA中，AP系统的敏感度一般高于HRP系统，空白值也较低，但AP价格昂贵，制备结合物所得率也较HRP低.
温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等.37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度.在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达顶峰.为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度.抗原抗体反应4℃更为**，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过 ye，以形成**多的沉淀.但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用
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试剂盒使用说明书组成： 1：预包被板: 96T/48T 2：酶标记抗体: (30倍浓缩)HRPIgG,亲合纯化 04mL x 1 3：标准品: -6 05mL x 2 4：EIA缓冲液: 含1% BSA, 005%吐温20 BPS 30mL x 1 5：标记抗体稀释液: 含1% BSA, 005%吐温20 BPS 12mL x 1 6：显色剂: TMB底物液 15mL x 1 7：终止液: 1N硫酸 12mL x 1 8：浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 005%吐温20 BPS 50mL x 1.
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