人纽蛋白(Human VCL)ELISA Kit厂家代测
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标本因素对ELISA测定的影响,血清是**常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源 性物质和外源性物质两种： 1． 内源性物质 有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果.常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异 性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等. （1）类风湿因子 人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性. 解决该情况的办法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本 稀释液中，使RF降解..人纽蛋白(Human VCL)ELISA Kit厂家代测欢迎致电北京方程生物获取相关资料。
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人纽蛋白(Human VCL)ELISA Kit厂家代测. 在ELISA实验中应注意以下问题： 1.在实验前应该按相关要求将实验试剂平衡至室温. 2.包被抗体和检测抗体应该是有高活性的且都针对同一抗原. 3.试剂保存：蛋白抗体类试剂保存于-20摄氏度，显色液洗涤液保存于2-8摄氏度. 4.各试剂在使用前应充分混匀，以保证试剂的均一性和准确性. 5.严格控制反应温度和反应试剂. 6.洗板次数，洗板液的量，洗板液浸泡时间的长短，洗板的力度都是应该注意的问题. 7.相关浓缩液应按要求稀释到相应比例方可使用，PH值要保持在7.2-7.4之间. 8.在终止反应时尽量避免微孔中存有气泡. 9.终止反应完成后应该在2min内完成酶标仪读数..
进行检测时，样品中的受检物质（抗原或抗体）与固定的抗体或抗原结合.通过洗板除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关.通过加入与酶反应的底物后显色，根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量，进行定性或定量的分析.由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的灵敏度..
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包被的方式 将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating).换言之，包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程.蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用力.这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响.载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面. 包被用抗体 包被固相载体的抗体应具有高亲和力和高特异性，可取材于抗血清或含单克隆抗体的腹水或培养液.如免疫用抗原中含有杂质（即便是极微量的），在抗血清中将出现杂抗体，必须除去（可用吸收法）后才能用于ELISA，以保证试验的特异性.抗血清不能直接用于包被，应先提取IgG，通常采用硫酸铵盐析和Sephadex凝胶过滤法.一般经硫酸铵盐析粗提的IgG已可用于包被，高度纯化的IgG性质不稳定.如需用高亲和力的抗体包被以提高试验的敏感性，则可采用亲和层析法以除去抗血清中含量较多的非特异性IgG.腹水中单抗的浓度较高，特异性亦较强，因此不需要作吸收和亲和层析处理，一般可将腹水作适当稀释后直接包被，必要时也可用纯化的IgG.应用单抗包被时应注意，一种单抗仅针对一种抗原决定簇，在某些情况下，用多种单抗混合包被，可取得更好的效果.
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