人低密度脂蛋白受体(Human LDLR)ELISA Kit厂家代测
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人低密度脂蛋白受体(Human LDLR)ELISA Kit厂家代测根据试剂的来源和标本的性状及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法. ELISA,即酶联免疫吸附实验,其基本原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面,加入待检标本,通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少.ELISA技术作为免疫标记技术(包含免疫荧光技术,免疫放射技术,免疫酶技术和免疫胶体金技术)中的一种,已广泛应用于科研和临床实验中,具有**,定性或者定量甚至定位的特点.. 双抗体夹心法,其基本原理是将一定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面,加入无关蛋白载体封闭未结合位点,然后加入待检标本,通过加入检测抗体,酶标记第二抗体后用TMB底物显色,微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关. 该方法的适用条件是:含有多个抗原表位的大分子物质.因为这种检测方法需要两种抗体,所以就涉及抗体配对的问题.一般而言,常用的抗体配对方法有一下几种:包被抗体为单抗,检测抗体为多抗;包被抗体为单抗,检测抗体为单抗,但这两种单抗针对的抗原表位不同;包被抗体为多抗,检测抗体为多抗,这两种多抗一般是来源于不同的宿主.
洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败.ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的.通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质.聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来.可以说在ELISA操作中,洗涤是**主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎
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保温 在ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后.抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA中似不恰当. ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生.以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有**贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触.这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点.在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此.这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育
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