人血管内皮生长因子(Human VEGF)ELISA Kit厂家代测
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ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法.Engvall 和Perlmann于1971年**应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)". ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标 抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或 抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，**后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量.人血管内皮生长因子(Human VEGF)ELISA Kit厂家代测欢迎致电北京方程生物获取相关资料。
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人血管内皮生长因子(Human VEGF)ELISA Kit厂家代测（2）过碘酸盐氧化法：本法只适用于含糖量较高的酶.辣根过氧化物酶的标记常用此法.反应时，过碘酸钠将HRP分子表面的多糖氧化为醛基很活泼，可与蛋白质上的氨基形成Schiff氏碱而结合.酶标记物按克分子比例联结，其**比例为：酶/抗体=1-2/1.此法简便有效，一般认为是HRP**可取的标记方法，但也有人认为所有试剂较为强烈，各批实验结果不易重演.. 按以上方法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和抗体.理论上，结合物中混有的游离酶一般不影响ELISA中**后的酶活性测定，因经过**洗涤，游离酶可被除去，并不影响**终的显色.但游离的抗体则不同，它会与酶标抗体竞争相应的固相抗原，从而减少了结合到固相上的酶标抗体的量.因此制备的酶结合物应予纯化，去除游离的酶和抗体后用于检测，效果更好.纯化的方法很多，分离大分子化合物的方法均可应用.硫酸铵盐析法**为简便，但效果并不理想，因为此法只能去除留在上清中的游离酶，但相当数量的游离抗体仍与酶结合物一起沉淀而不能分开.用离子交换层析或分子筛分离更为可取，高效液相层析法可将制备的结合物清晰地分成三个部分：游离酶、游离抗体和纯结合物而取得**的分离效果，但费用较贵. 结合物制得后，在用作ELISA试剂前尚需确定其适当的工作浓度.使用过浓的结合物，既不经济，又可使本底增高；结合物的浓度过低，则又影响检测的敏感性.所以必须对结合物的浓度予以选择.**适的工作浓度就是指结合物稀释至这一浓度时，能维护一个低的本底，并获得测定的**灵敏度，达到**合适的测定条件和测定费用的节省.就酶标抗体本身而言，它的有效工作浓度是指与其相应抗原包被的载体作试验时，能得到阳性反应的**高稀释度.例如某一HRP：抗人IgG制剂标明的工作浓度为1:5000，表示该制剂经1:5000稀释后，在与人IgG包被的固相作ELISA试验时，将发生阳性反应.但在用于具体的ELISA检测中，酶标抗体的**适工作浓度受到固相载体的性质、包被抗原或抗体的纯度以及整个检测系统如标本、反应温度和时间等的影响，因此必须在实际测定条件下进行"滴配"选择能达到高敏感度的**稀释度作为试剂盒中的工作浓度
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