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3.2.3 结合物的制备 酶标记抗体的制备方法主要有两种，即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法. （1）戊二醛交联法：戊二醛是一种双功能团试剂，它可以使酶与蛋白质的氨基通过它而联结.碱性磷酸一般用此法进行标记.交联方法一步法、两步法两种.在一步法中戊二醛直接加入酶与抗体的混合物中，反应后即得酶标记抗体. ELISA中常用的酶一般都用此法交联.它具有操作简便、有效（结合率达60%-70%）和重复性好等优点.缺点是交联反应是随机的，酶与抗体交联时分子间的比例不严格，结合物的大小也不均一，酶与酶，抗体与抗体之间也有可能交联，影响效果.诹讲椒ㄖ校?br> 先将酶与戊二醛作用，透析除去多余的戊二醛后，再与抗体作用而形成酶标抗体.也可先将抗体与戊二醛作用，再与酶联结.两步法的产物中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的比例结合的，较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度，但其偶联的有效率较一步法低.人高敏甲状腺素(Human u-T4)ELISA Kit厂家代测欢迎致电北京方程生物获取相关资料。
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人高敏甲状腺素(Human u-T4)ELISA Kit厂家代测保温 在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后.抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当. ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生.以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有**贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触.这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点.在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此.这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育
ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法.Engvall 和Perlmann于1971年**应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)". ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标 抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或 抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，**后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量.
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温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等.37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度.在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达顶峰.为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度.抗原抗体反应4℃更为**，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过 ye，以形成**多的沉淀.但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用
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