1. 包被ELISA板子或使用商品化ELISA板。
 2. 加待检样品：使之与固相抗体/抗原反应一段时问，让标本中的抗原/抗体与固相载体上的抗体/抗原结合，形成固相复合物。
 3. 加酶标抗体：使固相复合物与酶标抗体结合。
 4. 加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行抗原/抗体的定性或定量。

ELISA试剂盒的实践技巧：
 1. 操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度(保持在18 C～25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，要先查看水育箱温度，ELISA试剂盒是否符合要求。
 2. 正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次序要与说明书一致，否则可导致结果错误，实验重复性差。
3. 手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗涤次数不要超过说

明书**的洗涤次数，洗液在反应孑L内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流，造成孔问污染，导致假阴性或假阳性。
4. 要保证加液量一致ELISA试剂盒我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。
 5. 显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。