价格:
0.00/项目
品牌:卡梅德生物科技(天津)有限公司
起订:1项目
发货:55天内
信息标签:人源scFV抗体库构建服务,提供服务,医药与器械,生物制品
点击这里进行电话呼叫
点击这里QQ咨询
联系时一定要说在【贸易商务资源网】看到的将给您优惠!如果您也想和该公司一样在网站发信息有好排名,点击立即免费注册,发布产品推广。
人源scFV抗体库构建服务
卡梅德生物科技能够为客户提供基于抗体噬菌体展示文库技术的single-chain Fv(scFv)抗体文库构建服务。
抗体文库制备服务 – 人源scFV抗体库构建服务
噬菌体展示技术是一种用于识别蛋白质和其他大分子配体的体外筛选技术,被广泛应用于高亲和力抗体的筛选工作。通过噬菌体展示技术构建的抗体文库通常来源于RT-PCR扩增外周血单核细胞,脾细胞,骨髓细胞和扁桃体来源的mRNAs形成cDNA片段,将这些基因片段拼接到噬粒载体,再转入噬菌体形成共价结构蛋白表达和体外展示。抗体重链和轻链独立自由表达,然后随机地组合,形成噬菌体克隆数达到1011-1012的庞大抗体库。
Single-chain Fv(scFv)抗体文库是指将抗体的可变区(VH和VL)基因,尤其是CDR区域(互补决定区)采用不同的策略和方式,如氨基酸突变,移码读框等形成数目庞大的不同克隆,并从这些克隆中筛选出针对目的抗原的高亲和力单链Fv抗体。研究表明,抗体可变区的CDR3的多样性直接决定了抗原特异性和结合亲和力,并且CDR3-FR(frame region)组合的多样性决定了抗体经历何种方式的亲和成熟过程。相比Fab 抗体文库,由于scFv抗体分子量更小,约25kDa,scFV抗体更加稳定,也不容易形成多聚体。
噬菌体宿主体系
基于M13噬菌体pIII基因展示体系是目前应用广泛的文库展示系统,通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体pIII蛋白融合表达,使之参与噬菌体组装,并展示在噬菌体表面,形成噬菌体展示文库。卡梅德生物科技噬菌体展示平台拥有M13,T4和T7噬菌体系列,根据客户的项目需求(展示的蛋白或抗体片段的大小等参数),我们会采用不同的噬菌体系列进行文库构建。
同时,客户也可以提供抗原,我们进行体外外周血淋巴单核细胞敏化,从而获得更高亲和力和特异性的单克隆抗体,通常基于该方法制备的抗体亲和力能达到10-13 M级别。
项目流程:
步骤
|
服务内容
|
周期
|
抗体cDNA制备
|
1. 总RNA提取
2. 高保真RT-PCR制备cDNA
3. 系统对照:Actin特异引物PCR扩增,以鉴定逆转录产品cDNA质量
|
8-9周
|
构建抗体库
|
1. 引物设计与合成:抗体可变区兼并引物设计、合成
2. 以cDNA为模板,PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因
3. scFv基因拼接
4. 噬粒构建与转化:酶切、连接scFv和噬菌粒载体,电击转化TG1宿主菌,构建抗体库
5. 鉴定:随机挑选20-50个克隆,PCR鉴定阳性率,测序和分析抗体序列
6. 包装,>1⨯1013噬菌体颗粒/ml
|
交付
|
1. 构建报告,包括详细建程序,代表性序列信息。
2.产品交付:细菌和噬菌体两种形式抗体库。
|
项目特征:
*免疫,天然和合成抗体噬菌体文库构建
***:预制抗体文库筛选服务
*高库容量:独立克隆数 107 - 1012
*高亲和力抗体制备:10-7 - 10-13
*多种噬菌体展示系统:M13,T4,T7
*个性化的淘筛策略
*严禁完整的QC标准
卡梅德生物欢迎您的咨询!