【产品简介】
北京方程生物
电话:010-57266903
试剂品牌:HermesCriterionBiotechnology (HCB)
产品名称:去甲肾上腺素定量分析试剂盒
检测方法:竞争性抑制酶联免疫吸附测试
包装规格:96份/盒
检测对象:人
适用样本:血清、血浆、全血
灵敏程度:最低检出量为 1.0 ng/ml
预期用途:本试剂盒用于定量检测未知样品中去甲肾上腺素的含量。
生产厂商:加拿大ELIXIR医药公司 电话 001-604-7381281 www.hcb-ca.com
【实验原理】
竞争法:辣根过氧化物酶直接标记特异性抗原,并与样本中的抗原同时竞争固相包被抗体上
的相同结合位点。抗原的浓度和免疫复合物呈负相关的函数关系,并表现在剂量反应曲线上,
以该曲线为依据,通过计算分析后,可以对样本进行定量,从而得到未知样本中的质量浓度。
【试剂组成】
1. 精密度微孔板:预先包被的固相微孔板。
密封铝箔袋, Costar聚丙乙烯PPE微孔,内含干燥剂。12条X8孔,1块微孔板框架。 每条微孔可以根据具体使用数量进行单独拆卸。2-8摄氏度冷藏储存,真空密闭的微孔 板可以保存12个月以上。剩余的微孔板放回含有干燥剂的铝箔袋内可以保存5个月以上。
2. 酶结合物:辣根过氧化物酶直接标记。6毫升/1瓶,含稳定剂透明液体。2-8度冷藏储存。
3. 标准品:1000微升/6瓶,含稳定剂的透明液体。2-8摄氏度冷藏储存。 I-0ng/ml,II-50ng/ml,III-100ng/ml,IV-250ng/ml,V-500ng/ml,VI-1000ng/ml。
4. 显色剂A: 3%双氧水,无色透明液体。6毫升/1瓶,2-8摄氏度冷藏储存。
5. 显色剂B: TMB四甲基联苯胺,无色透明液体。6毫升/1瓶,2-8摄氏度避光储存。 注:显色剂A和显色剂B的使用:
方式一、先依次在微孔内加入50微升显色剂A后再依次加入50微升显色剂B,避光反应15分钟。
方式二、提前将显色剂A与显色剂B按照1:1的比例混合后备用,混合后的溶液室温避光可以
储存15分钟,加样时直接加入100微升混合溶液即可。如果混合溶液在未使用时呈现淡蓝色,
请勿使用。
6. 终止液:10%硫酸,无色透明液体。6毫升/1瓶,2-8摄氏度冷藏储存。终止液具有轻微 的腐蚀性,如接触皮肤用冷水冲洗即可。
7. 浓缩洗涤液:磷酸盐缓冲液,无色透明液体。8毫升/2瓶,2-8摄氏度冷藏储存。 按照1:9的比例配制洗涤液。即8毫升浓缩洗涤液加入70毫升蒸馏水。稀释后的洗液可 2-8摄氏度长期冷藏储存。如果出现结晶物,可放置于37摄氏度水浴箱内5-10分钟。 浓缩洗涤液出现浑浊或絮状物不影响使用。
【实验仪器】
1. 酶标仪:读取微孔板内各孔液体的吸光度。
定量试验不使用阈值设置。报告种类选择原始数据报告,吸光度报告,浓度报告,曲线
报告(需设立内置打印机或电脑联机)。
标准品设置包括标准品的数量,浓度,单位。
标准曲线设置包括曲线种类的设置和坐标轴的设置。
虑光片应设置检测波长为450纳米,参考波长为630纳米的双波长测量,使用双波长测量
则不必设空白孔。 ELISA定量测定时,应选用logit-log或四参数数据处理模式。负相关数据,拟合数学模 型的优选顺序是四参数LOGISTIC回归,LOGIT-LOG线性回归,三次多项式(3/2次方程)。
2. 洗板机:自动清洗微孔板内未结合的残余物质。
将提前配置的洗液加入自动洗板机的洗液瓶里,然后快速甩掉微孔板内反应液于废液池
内,用洗板机洗板3次,每次浸泡1分钟,清洗后拍干反应板。洗板机喷水口很容易被洗
液形成的结晶物堵塞,造成各孔间较大差异,因此应当注意按时对洗板机进行清洁保养。
3. 水浴箱:对微孔反应板进行恒定的加温加湿。
将水浴箱调节至37摄氏度,正负误差2摄氏度,当水浴箱内置温度指示针达到37摄氏度
时,将微孔板放入,使水浴箱内的液面与微孔反应板面平行,以达到均衡的温度和湿度。
4. 微量振荡器:对微孔内的混合溶液进行充分混匀。将已用封口贴封闭的微孔板平稳牢固
的放置于微量振荡器的载物平台上,以中等档位的力度震荡30秒。
【实验耗材】
1. 洗液瓶:手工清洗微孔板内未结合的残余物质。将提前配置的洗液加入洗液瓶里,然后
快速甩掉微孔板内反应液于废液池内,在废液池上方将微孔板倾斜45度以洗液瓶出水口
对准微孔逐一冲洗5次,将各孔注满洗液,静置1分钟,甩掉微孔板内洗液,按照以上步
骤重复3次。手工清洗应注意冲洗水流的力度适中,不宜过大。
2. 移液器:移取液体试剂和标本。
吸取液体时,移液器保持竖直状态,将吸头插入液面下2至3毫米,用大拇指将按钮按至
第一停点,然后慢慢松开按钮回原点,接着将按钮按至第一停点排出液体,稍停片刻继
续按按钮至第二停点吹出残余的液体后松开按钮。
如果样品是组织匀浆、体液分泌物、细胞培养液可以先吸放几次样品以润湿吸头,按下
按钮至第二停点,慢慢松开按钮至原点,将按钮按至第一停点排出样品后取下有残留液
体的吸头。
使用多道(如8道或12道)移液器,则可以将移液器第一道对准第一个枪头,然后倾斜
地插入,前后方向摇动即可卡紧,吸头卡紧后可看到连接部分形成清晰的密封圈。
3. 移液器吸头:配合移液器使用。在使用前将吸头置于120摄氏度15-20分钟灭菌,后经烤 箱100摄氏度烘干水分即可使用。吸取酶结合物可以使用同一个吸头加样,吸取显色剂A 可以使用同一个吸头加样,吸取显色剂B可以使用同一个吸头加样,吸取终止液C可以使 用同一个吸头加样。每个标准品与待测样品不能重复使用同一个吸头加样。
4. 蒸馏水和500毫升量杯:配置洗涤液。每瓶浓缩洗液为10毫升,全部倒入量杯中,按照1: 10的比例加入90毫升的蒸馏水。稀释后的洗液可在2-8摄氏度长期冷藏储存。
5. 自制冰浴装置:稳定实验加样时的温度在加样时,首孔与末孔加样时间间隔过长(应尽
可能控制在15分钟内),会导致各微孔间有不同的起始反应时间,从而影响到测量值的
准确性和重复性。 将冰浴装置放置于4摄氏度的冰箱或冰柜内15-30分钟后取出,将微孔板平稳摆放在冰浴 装置上,进行实验加样,这样可以缩小孔间差,提高实验精度。当实验室温度高于28 摄氏度时,建议采取此种方法。
6. 自制避光装置:使加入显色剂A和B的微孔板能在避光的条件下反应。
方式一、可以将加入显色剂的微孔板放置在无杂物的抽屉内。
方式二、可以将本试剂盒的盒盖扣在加入显色剂的微孔板上,使外部可见光无法照射到即可。
【样品处理】
1. 大部分标本在2-8摄氏度,可放置保存3天,负20摄氏度,可放置保存1个月以上,负70 摄氏度,可放置保存6个月以上。长时间储存的标本,在使用时需要离心。制备好的新 鲜标本可以在22-25摄氏度于8小时内使用,如超过时间应视情况冷藏或冷冻保存。 反复冻溶会使抗体效价跌落,标本如需保存做多次检测,宜少量分装冻存。不要使用水 浴解冻样品或试剂。
2. 血清:采集新鲜血液,加入无菌试管中。采血后室温静置1小时,用离心机4摄氏度,2500
转离心15分钟,取上清部分,分装冻存备用。
3. 血浆:采集新鲜血液,加入无菌试管中。按1:9加入抗凝剂(EDTA、草酸钠、肝素、枸
橼酸钠),30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染,也可以直接用抗凝管采集血
液,建议使用EDTA抗凝。用离心机4摄氏度,2500转离心10分钟,取上清部分,分装冻
存备用。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。抗凝不完全
的标本因纤维蛋白原干扰会造成假阳性。
【注意事项】
1.本试剂盒是仅供研究使用的体外检测试剂。混用其他批次其他厂商,无法保证检测效果。
2.标本宜在新鲜时检测。从冰箱取出试剂后,室温平衡(20-25 C)达到 30分钟。
3.浓缩洗涤液需用新鲜蒸馏水或去离子水按要求稀释,不合格的蒸馏水可能使空白值增高。
4.2-8 C妥善保存已打开而未使用的酶标板。必须密封干燥。
5.加样前应使溶液充分混匀,按规定的量和顺序进行。并将液体加在孔底,避免加在孔壁
上部,注意不可出现气泡.避免污染。
6.加样时避免样本溅出,如有样本溅出孔外时,应用吸水纸轻轻拭干,并做相应记录
加样后微孔板应及时温育,尽量缩短加样后温育前的等待时间
7.所有样品都应视同为潜在危险能够致病的污染。实验期间,必须戴一次性手套,因为已
知的测试方法不可能提供各种样品不会传送传染物质的完全保证。
8.按照病毒灭活的方式处理的所有使用完毕的样品。
9.所有废液添加次氯酸钠到 1.0%浓度至少 30分钟。 才能再做无害化处理。
10.加显色剂尽量避免溅出孔外。不使用过期显色剂,肉眼可见浅兰色的 B显色剂不能使用。
11.显色剂避免接触金属器械,避免在空气中暴露时间过长。远离热或火源。
12.终止显色完后应及时终止,加终止液时避免出现气泡
【操作步骤】
1. 预处理:将微孔板、液体试剂、待测样本于室温15至30摄氏度平衡30分钟。
按照稀释比例配制洗涤液。确定需要的微孔数量,将微孔板条稳固的安插在板架上,将
剩余的微孔板放回铝箔袋内,4摄氏度冷藏保存。
2. 加样:调整移液器刻度,设定容量值。
新装吸头应先吸入一次液体并将之排回原容器中。移液器吸头为一次性使用。
在相应微孔中分别加入100微升的标准品以及待测标本。
标准品的瓶塞应盖在原有对应的标准品瓶口上,切勿混用。
3. 每孔分别加入酶结合物50微升。
加样完成后,用PET封口贴密封微孔板,使用微量振荡器,震动30秒。
手工混匀:单手握紧微孔板架长边两侧,在实验操作台上向左右轻轻平行摇晃60秒,使
混合液体均匀。
4. 孵育:将已密封的微孔板,放置于 37摄氏度的水浴箱中,使水浴箱内的液面与微孔板 面平行,孵育时间为 60分钟。
5. 清洗微孔板:孵育完毕后,揭开封口贴弃尽微孔内液体。 按照自动洗板或手工洗板的方法,清洗微孔板 3到 5次。 洗涤结束后用吸水纸拍干微孔壁内残余的液体,并将微孔板外部液体与指纹擦拭干净。
6. 显色反应:将清洗后的微孔板平置于操作台上,
每孔加入 50微升的显色剂 A,再加入 50微升的显色剂 B。
使用多道移液器加样,每孔加入提前准备好的 AB混合液 100微升。
加样完成后,使用微量振荡器,震动 10秒。
手工混匀:单手握紧微孔板架长边两侧,在实验操作台上向左右轻轻平行摇晃 30秒,
使混合液体均匀。将微孔板置于避光环境中,室温 15-30摄氏度静置 15分钟。
7. 终止反应:将微孔板从避光环境中取出,此时可以明显看到各微孔内呈现不均一的蓝色, 每孔加入 50微升的终止液,轻微混匀。此时各微孔内的蓝色渐变为黄色。
8. 吸光度测量:将已终止反应的微孔板置于酶标仪读数槽内。
使用检测波长 450纳米与参考波长 630纳米的双波长测量读取各孔的吸光度值。
数据读取应在 15分钟内完成。