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封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件.并非所有的ELISA固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底增高.一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果.特别是用单抗腹水直接包被时，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用.但在间接法测定中，封闭一般是不可少的（见2.2.2）.包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或锡袋中，在低温可保存数月.人大肠癌专一抗原2进口ELISA试剂盒报价欢迎致电北京方程生物获取相关资料。
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标本因素对ELISA测定的影响,血清是最常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源 性物质和外源性物质两种： 1． 内源性物质 有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果.常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异 性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等. （1）类风湿因子 人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性. 解决该情况的办法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本 稀释液中，使RF降解..
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花板无梯度背景高 在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中的孔有颜色但没有梯度，背景也可能较高，. 出现该现象的可能原因： 底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存，实验前溶液已经变蓝. 孵育温度过高或者孵育时间过长，发生了较强的非特异性吸附. 没有按说明书要求洗板，特别是洗板时洗涤液的量少加了. 加样时没有换枪头造成交叉污染. 花板现象：低浓度或者低活性的包被抗体或者检测抗体，封闭不足导致的本底不稳定，洗板不充分，包被板子的问题.
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