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3.2.1酶 用于ELISA的酶应符合以下要求：纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，制备成酶结合物后仍继续保留它的活性部分和催化能力.最好在受检标本中不存在相同的酶.另外，它的相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等. 在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP).在少数商品ELISA试剂中，应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等.国产ELISA试剂一般都用HRP制备结合物.HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，分子量为44000，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质.主酶无色糖蛋白在275nm波长处有最高吸收峰，辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰.HRP的纯度用RZ(Reinheit Zahl，德文，意为纯度数）表示，是403nm的吸光度与280nm吸光度之比，高纯度的HRP的RZ≥?.0. HRP除符合上述的ELISA中标记酶的要求外，更有价格低廉和性质较稳定的特点.值得注意的是，在选用酶制剂时，除其纯度RZ外，更应注意酶的活力.高纯度的酶如保存不当，活力也会降低.酶制剂的活力以所含的酶活力单位表示，可用对底物作用后生成产物量的测定进行试验.. 国外很多ELISA试剂采用碱性磷酸酶（AP）作为标记酶.常用的AP有两个来源，分别从大肠杆菌和小牛肠膜中提取.不同来源的酶生化特性特性略不相同，从大肠杆菌中提取的AP分子量为80000，酶作用的最适合pH为8.0；用小牛肠膜中提取的AP分子量为100000，最适pH为9.6.在ELISA中，AP系统的敏感度一般高于HRP系统，空白值也较低，但AP价格昂贵，制备结合物所得率也较HRP低.人凝血因子Ⅸ进口ELISA试剂盒报价欢迎致电北京方程生物获取相关资料。
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人凝血因子Ⅸ进口ELISA试剂盒报价试剂盒操作注意事项： 1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温.稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存 2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质 3.不用的其它试剂应包装好或盖好,不同批号的试剂不要混用,保质前使用,使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 4.使用干净的塑料容器配置洗涤液,使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品, 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水 5.底物A应挥发，避免长时间打开盖子,底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下,避免用手接触，有毒，实验完成后应立即读取OD值 6.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样 7.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作.
ELISA载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管.以微量滴定板最为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式.为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同.ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果.现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利.聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大.. 良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近.聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能.常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG（一般为10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度.控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右.计算全部读数的平均值.所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%. 与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯.作为ELISA固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可剪割，价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整.聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高..
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洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败.ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的.通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质.聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来.可以说在ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎
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