人CD4分子进口ELISA试剂盒报价

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3.2.1酶 用于ELISA的酶应符合以下要求：纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，制备成酶结合物后仍继续保留它的活性部分和催化能力.最好在受检标本中不存在相同的酶.另外，它的相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等. 在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP).在少数商品ELISA试剂中，应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等.国产ELISA试剂一般都用HRP制备结合物.HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，分子量为44000，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质.主酶无色糖蛋白在275nm波长处有最高吸收峰，辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰.HRP的纯度用RZ(Reinheit Zahl，德文，意为纯度数）表示，是403nm的吸光度与280nm吸光度之比，高纯度的HRP的RZ≥?.0. HRP除符合上述的ELISA中标记酶的要求外，更有价格低廉和性质较稳定的特点.值得注意的是，在选用酶制剂时，除其纯度RZ外，更应注意酶的活力.高纯度的酶如保存不当，活力也会降低.酶制剂的活力以所含的酶活力单位表示，可用对底物作用后生成产物量的测定进行试验.. 国外很多ELISA试剂采用碱性磷酸酶（AP）作为标记酶.常用的AP有两个来源，分别从大肠杆菌和小牛肠膜中提取.不同来源的酶生化特性特性略不相同，从大肠杆菌中提取的AP分子量为80000，酶作用的最适合pH为8.0；用小牛肠膜中提取的AP分子量为100000，最适pH为9.6.在ELISA中，AP系统的敏感度一般高于HRP系统，空白值也较低，但AP价格昂贵，制备结合物所得率也较HRP低.人CD4分子进口ELISA试剂盒报价欢迎致电北京方程生物获取相关资料。

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人CD4分子进口ELISA试剂盒报价ELISA载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管.以微量滴定板最为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式.为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同.ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果.现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利.聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大.. 良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近.聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能.常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG（一般为10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度.控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右.计算全部读数的平均值.所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%. 与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯.作为ELISA固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可剪割，价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整.聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高..

3.2.2 抗原和抗体 制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与酶联结时其他杂蛋白的干扰.最好用亲和层析纯的抗体，这样全部酶结合物均具有特异的免疫活性，可以在高稀释度进行反应，实验结果本底浅淡.如用F(ab')2进行标记，则更可避免标本中RF的干扰.在ELISA中用酶标抗原的模式不多，总的要求是抗原必须是高纯度的..

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3.2.3 结合物的制备 酶标记抗体的制备方法主要有两种，即戊二醛交联法和过碘酸盐氧化法. （1）戊二醛交联法：戊二醛是一种双功能团试剂，它可以使酶与蛋白质的氨基通过它而联结.碱性磷酸一般用此法进行标记.交联方法一步法、两步法两种.在一步法中戊二醛直接加入酶与抗体的混合物中，反应后即得酶标记抗体. ELISA中常用的酶一般都用此法交联.它具有操作简便、有效（结合率达60%-70%）和重复性好等优点.缺点是交联反应是随机的，酶与抗体交联时分子间的比例不严格，结合物的大小也不均一，酶与酶，抗体与抗体之间也有可能交联，影响效果.诹讲椒ㄖ校?br> 先将酶与戊二醛作用，透析除去多余的戊二醛后，再与抗体作用而形成酶标抗体.也可先将抗体与戊二醛作用，再与酶联结.两步法的产物中绝大部分的酶与蛋白质是以1:1的比例结合的，较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度，但其偶联的有效率较一步法低.

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