ATCC细胞冷冻保存是**普遍的保存方法
发布时间:2016-10-09 14:07:00 产品编号:GY-5-103775262 分享
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ATCC细胞冷冻保存是**普遍的保存方法,南京科佰生物科技有限公司作为专业的ATCC细胞厂家,为大家专业分享下ATCC细胞的常见冷冻保存方法:
冷冻保存方法分类
(1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成ATCC细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型ATCC细胞与hybridoma之保存。
冷冻保存方法步骤
(1)冷冻前一日前更换半量或全量培养基,观察ATCC细胞生长情形。
(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):将DMSO加入新鲜培养基中,**后浓度为5~10%,混合均匀,置于室温下待用。
(3)依ATCC细胞继代培养之操作,收集培养之ATCC细胞,取少量ATCC细胞悬浮液(约0.1ml)计数ATCC细胞浓度及冻前存活率。
(4)离心,去除上清液,加入适量冷冻保存溶液,使ATCC细胞浓度为1~5×106cells/ml,混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1ml/vial,并取少量ATCC细胞悬浮液作污染检测。
注意事项
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